取材作為原代細胞培養(yǎng)過程中至關重要的一步,那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢?讓我們一起來看看吧!
一、皮膚和粘膜
主要取皮片,面積一般2~4平方厘米。
二、內臟和實體瘤
1.無菌環(huán)境;
2.熟悉所需組織的類型和部位;
3.要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結締組織。
三、血液細胞
一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞,取材時應注意抗凝。
四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞
嚴格無菌,注意抗凝,還要盡快分離培養(yǎng),離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng),不宜低溫存放。
五、動物組織取材——鼠胚組織
1.用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物;
2.將其浸泡在含有75%酒精的燒杯中,5分鐘后取出動物;
3.在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢,切開皮膚;
4.用無菌操作法解剖取胚。
六、動物組織取材——幼鼠胚腎(或肺)
幼鼠采用上述方法處死消毒后→腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側→采用無菌法打開胸腔取肺,或從背部打開腹腔取腎。
七、雞(鴨)鳥類胚胎組織
1.取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋,用照蛋燈在暗處燈檢,若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋,說明胚體發(fā)育良好,并用有色筆劃出氣室和胚體位置;
2.將胚蛋置于蛋架上,先用溫水清洗蛋殼,再用75%酒精棉球擦干;
經碘酒、75%酒精消毒后,在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室,沿氣室邊緣去除蛋殼;
3.用眼科鑷撕去殼膜,暴露出雞胚;
4.用彎頭鑷輕挑起胚頭,取出胚胎,放入無菌平皿中,解剖取材。
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