簡要描述:原代乳腺上皮細胞*培養(yǎng)基(Human Mammary Epithelial Cell Medium)是一種促進人乳腺原代上皮細胞體外生長的培養(yǎng)基。
產(chǎn)品名稱:原代乳腺上皮細胞*培養(yǎng)基(Human Mammary Epithelial Cell Medium)
產(chǎn)品說明:原代乳腺上皮細胞*培養(yǎng)基(Human Mammary Epithelial Cell Medium)是一種促進人乳腺原代上皮細胞體外生長的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物以及生長因子等。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時,pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個合適的營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進體外人乳腺原代上皮細胞的生長和擴增。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明:
?使用前準備
(1)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。
(2)提前30min從4℃冰箱取出*培養(yǎng)基平衡至室溫,提前從-20℃冰箱取出所需體積的細胞外基質(zhì)膠冰上融化。
?乳腺原代細胞培養(yǎng)
(1)采用預冷的DMEM/F12培養(yǎng)基將細胞外基質(zhì)膠(Corning#356231)按1∶ 50比例稀釋,至少提前30min 將稀釋后的基質(zhì)膠預鋪在培養(yǎng)瓶/板底部表面,并使其*覆蓋底部表面,30~60 min后吸干備用。
(2)將分離并計數(shù)后的細胞懸液參考表1中細胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板,補加*培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后放置于培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件下進行培養(yǎng)。
(3)原代細胞初次接種后2-3天內(nèi)勿動(利于細胞貼壁)。
?原代乳腺上皮細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達80~90%時即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細胞,棄去舊培養(yǎng)液,加入適量TrypLE*Express酶(Gibco#12605010)37℃孵育,10~20min后取出,輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化,并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,室溫,300g,離心5min。
(4)棄上清,以1-2mL*培養(yǎng)基重懸細胞,活細胞計數(shù),將細胞懸液按適合的細胞密度接種于預鋪有基質(zhì)膠的培養(yǎng)瓶/板底部,預鋪方法同上。
(5) 補加*培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置于培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:
本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
使用產(chǎn)品時應注意無菌操作,避免污染。
本產(chǎn)品中不含血清,含有抗生素,如無特別需要,不用額外添加血清和其他抗生素,可直接使用。
為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期后,將無法達到理想的使用效果。
樣本若為腫瘤樣本,建議使用術中樣本,且腫瘤細胞比例越高(至少>50%),培養(yǎng)成功率越高,不推薦用于少量樣本(如穿刺或者循環(huán)腫瘤細胞)的培養(yǎng)。
本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。