簡要描述:胃癌3D類器官培養(yǎng)基(Gastric Carcinoma Organoid Medium)是一種為促進人源胃癌類器官體外形成和擴增而開發(fā)的培養(yǎng)基。
產(chǎn)品名稱:胃癌3D類器官培養(yǎng)基(Gastric Carcinoma Organoid Medium)
產(chǎn)品說明:胃癌3D類器官培養(yǎng)基(Gastric Carcinoma Organoid Medium)是一種為促進人源胃癌類器官體外形成和擴增而開發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個理想人源胃癌類器官體外培養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進體外人源胃癌類器官的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結果與臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明:
?實驗前準備
(1)15mL無菌離心管、1.5mL離心管、24孔細胞培養(yǎng)板、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30min。
(2)提前30min從4℃冰箱取出胃癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫,提前1h從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?胃癌類器官培養(yǎng)
(1)將獲取的胃癌原代細胞懸液計數(shù),根據(jù)計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5 mL離心管中。
(2)補齊預冷的培養(yǎng)基至所需體積,將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻(全程冰上操作),使得胃癌原代細胞終濃度為5×106個細胞/毫升。
(3)然后將細胞與基質(zhì)膠的混合液按照50μL/孔呈半球形點膠于24孔板。
(4)將培養(yǎng)板放入5%CO2 37 ℃培養(yǎng)箱中30min,待基質(zhì)膠*凝固。
(5)沿孔壁每孔緩慢加入500μL預先恢復至室溫的類器官培養(yǎng)基,置5%CO2 37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
(6)3天后鏡下觀察類器官形成情況,粒徑大于30~50μm即認為類器官已經(jīng)形成,每3天更換一次培養(yǎng)基進行培養(yǎng),持續(xù)觀察類器官大小,鏡下觀察大部分類器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集類器官進行后續(xù)實驗。
?胃癌類器官收集
(1)棄培養(yǎng)基,每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑,室溫放置1min。
(2)輕輕吹打混勻,收集至15mL離心管中,50rpm恒溫震蕩解離10-20min,解離之后1500rpm離心3 min,輕輕吸去上清,待用。
?胃癌類器官傳代
(1)收集的類器官,加入適量的消化酶,37℃,200rpm消化(具體時間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定,以肉眼可見顆粒明顯減小一半為準,可中間取消化的類器官顯微鏡觀察,類器官消化至3~10個細胞集合體理想)。
(2)消化*后1500rpm離心3min,棄上清,使用清洗液重懸后1500rpm離心3min。
(3)加入預冷的胃癌類器官培養(yǎng)基進行重懸,計數(shù),按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.樣本需為腫瘤組織,且腫瘤細胞比例越高(>50%),類器官培養(yǎng)成功率越高;
3.使用產(chǎn)品時應注意無菌操作,避免污染。
4.為保持本產(chǎn)品的愚佳使用效果,不宣將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。5.類器官培養(yǎng)過程要輕柔,避免基質(zhì)膠凝固后散膠。
6.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
7.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。