簡要描述:原代宮頸癌*培養(yǎng)基(Human Cervical Carcinoma Cell Medium)是一種為促進宮頸鱗癌原代細胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。
產(chǎn)品名稱:原代宮頸癌*培養(yǎng)基(Human Cervical Carcinoma Cell Medium)
產(chǎn)品說明:原代宮頸癌*培養(yǎng)基(Human Cervical Carcinoma Cell Medium)是一種為促進宮頸鱗癌原代細胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)和低濃度的胎牛血清。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時,pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進體外人宮頸鱗癌原代細胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明:
?使用前準備
(1)DMEM/DF12培養(yǎng)基稀釋后的基質(zhì)膠(Corning#356231)(100倍稀釋)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。
(3)提前30min從4℃冰箱取出*培養(yǎng)基平衡至室溫。
?宮頸癌原代細胞培養(yǎng)
(1)至少提前半小時使用稀釋后的基質(zhì)膠預(yù)鋪培養(yǎng)瓶/板,使用前吸干基質(zhì)膠,用稀釋液潤洗一遍。
(2)將分離并計數(shù)后的細胞懸液參考表1中細胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板,補加*培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。
(3)原代細胞初次接種后2-3天內(nèi)勿動(利于細胞貼壁),第一次換液建議換半液。
?宮頸癌原代細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細胞,棄舊培養(yǎng)液,加入0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用終止培養(yǎng)基終止消化,并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500rpm離心3 min。
(4)棄上清,以1-2mL*培養(yǎng)基重懸細胞,活細胞計數(shù),將細胞懸液按活合的細胞密度接種干培養(yǎng)瓶/板.,
補加*培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項:
本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
本產(chǎn)品中含有低濃度血清和原代細胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可直接使用。
為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
樣本需為宮頸鱗癌術(shù)中樣本,且腫瘤細胞比例越高(至少50%),培養(yǎng)成功率越高,不推薦用于少量樣本(如活檢或者循環(huán)腫瘤細胞)的培養(yǎng)。
本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。